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两性霉素B中三乙胺残留溶剂测定方法验证

 [摘要]两性霉素B原料药在生产过程中会产生三乙胺、乙醇、丙酮、二甲基甲酰胺(DMF)4种残留溶剂，在已经完成的两性霉素B残留溶剂测定方法验证的基础上增加了三乙胺的相关数据，并在其LOQ到其质量标准的120％范围内进行了方法的全面验证。结果表明，该方法专属性强，测定结果更真实、准确。[关键词]气相色谱法：两性霉素B；三乙胺1材料与方法1．1仪器气相色谱主机：Agilent6890N；色谱工作站：AgilentChemstation10．02；顶空进样器：Agilent7694E。1．2试剂二甲基亚砜(DMSO)：TEDIA色谱纯；三乙胺(天津科密欧化学试剂开发中心)：色谱纯；乙醇(天津北方化玻购销中心)：分析纯；丙酮(天津永大化学试剂开发中心)：分析纯：Ⅳ一二甲基甲酰胺(D)：MERCK色谱纯；两性霉素B供试品：华北制药华胜有限公司生产。1．3色谱条件色谱柱：AgilentDB一5(30m×0．53mmID×5皿)毛细管柱；载气：N2；流速：5．0mL／mim分流比：30／1；进样口温度：200℃；检测器：FID；检测器温度：250℃；程序升温过程：初始温度40℃，保持时间Imin，升温速率：20~C／min，最终温度：200℃，保持时间2min，运行时间：I1min；顶空进样器样品瓶温度：120℃；进样环温度：125℃；传输线温度：130℃；样品瓶平衡时间：40rain；进样体积：1mL。1．4标准溶液配制标准储备液：精密粥【翮日1．25g，乙醇1．25g，DMF1．50g，三乙胺8Omg于装有，DMSO的5OⅡlL容量瓶中，用DMS0溶解并定容，其=}i丙酮25000llg／mL，乙醇25000g／mL，DMF30000ug／mL，三乙胺I600ug／mL。标准溶液：吸取标准储备液0．5mL于50mL容量瓶中，用DMSO稀释定容。其中丙酮2501lg／mE，乙醇250ug／mL,DMF300ug／mL,_~Z．J胺l6llg／mL。再吸取该溶液5．0mL于20ⅡIL的顶空进样瓶中，压盖。1．5系统适用性测定以DMSO作为空白溶液进样，标准溶液连续进6针，系统适应性测定符合标准，其中RSD<~3．5％，拖尾因子≤1．1，理论塔板数≥29274，达到可接受标准。结果见表1。1．6供试品溶液的制备和测定精密称定供试品0．25g于2OmL顶空进样瓶中，准确加入5．0mLDMSO溶解后，压盖。供试品平行配制双份样品，结果取平均值。2结果与讨论2．1专属性以DMSO作为空白溶液进样，三乙胺溶液中峰保留时间是5．293min，在空白溶液中加入一定量的三乙胺溶液，确定三乙胺的保留时间为5．330min。选取一批两性霉素B供试品(批号：A06040)，加入一定量的三乙胺溶液后进样。2．2方法准确度测定将标准溶液的浓度定为100％。2．2．1供试品溶液配制选择两性霉素B供试品(A06040)，定量称取12份，随机选取3份作为空白样品对照，其余9份分成3组，待用。分别吸取标准溶液0．2、0．3、0．4mL于50mL容量瓶中，用DMSO稀释至刻度，摇匀。从中吸取5．0mL分别加入到第一组供试品中。加入三乙胺的浓度分别为6．41、9．61、12．82pg／mL，相对浓度分别为40％、60％、80％。2．2．2测定结果两性霉素B供试品中加入3组不同浓度的三乙胺，测定三乙胺的平均回收率为99．6％，9个回收率值2．3方法精密度测定两性霉素B供试品(A06040)定量称取6份，配制成测试样品溶液。通过测试，6份供试品中三乙胺含量的RSD为4．4％，达到可接受标准。2．4方法中间精密度测定选择3个不同批号的两性霉素B供试品(A06033、A06034、A06040)配制成测试溶液。每份测试溶液测试两次，连续测试3d。测得三乙胺含量的RSI)~9．3％，达到可接受标准。2．5最小检测限、最小定量限测定2．5．I噪声测定以DMSO为空白，进样3次，计算平均噪声。结果见表6。表6噪声测定结果·溶剂名称噪声1噪声2噪声3平均噪声ODDMsoo．1745o．16980．1746o．173注：噪声测定范围为4．76～5．82min。2．5．2标准储备液精密称取丙酮1．25g，乙醇L25函D肝1．50g，三乙胺8Omg于5OⅢL容量瓶中，用DMS0溶解并定容。2．5．3标准溶液量取标准储备液0．5mL于50mL容量瓶中，用DMSO稀释定容。其中三乙胺浓度为l6．ooug／mL。2．5．4最小检测限(LOD)~t定吸取0．9ⅡlL标准溶液于50ⅡlL容量瓶中，用DMSO稀释，摇匀。2．5．5最小定量限(LDo)测定吸取2．7mL标准溶液于5OnlL容量瓶中，用DMSO稀释，摇匀。2．5．6测定结果通过测试，确定三乙胺最，J、检测限∞D)为5．8×10一e，三乙胺最小定量限(L为17．3×10。结果见表7、表8。2．6验证范围内的线性测定标准溶液中三乙胺浓度为16．0ug／mL，将此浓度定为100％，并配制30％、60％、80％、120％的三乙胺溶液，以三乙胺浓度对相应峰面积做回归曲线，计算回归方程及相关系数r。三乙胺在LOQ---120％浓度范围内，浓度与峰面积成线性，其相关系数为Q99923，达同接受标准。y=7．69298x-i．66927，r=O．999233讨论3．1耐用性测试改变柱流速为4．8、5．2mL／min，改变升温速率为18、22℃／翻in，分别进行系统适应性及样品的测试，改变流速后，三乙胺含量的RSD为7．896；改变升温速率后三乙胺含量的RSD为9．996，均达到可接受标准。4结论通过对两性霉素B残留溶剂测定方法的验证，在三乙胺L00~120％的范围内，系统适应性、方法准确度、方法精密度、方法中间精密度、线性、方法耐用性均达到了验证的可接受标准。确定三乙胺最小检测限(L0D)为5．8×l0，三乙胺最小定量限(L00)为17．3×10。

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